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实验稳定性不好,可能是你的转基因小鼠模型没选对

2024-07-05

实验稳定性关乎着结论的可靠性和可重复性。动物实验必须设计良好、符合伦理、有效执行、正确分析、清晰呈现,并正确解释,所获得的结论才能被学界接受和认可。那么,转基因小鼠等小鼠模型的选择为什么会影响到实验的稳定性?集萃ob电竞官网入口 为您解读。
近交系动物-有效控制动物模型的稳定性

近交系动物-有效控制动物模型的稳定性

近交系(Inbred strain),又称为为纯系动植物,随着不断近亲饲养,想一想在表观遗传型上近乎雷同。如BALB/c小鼠、C57BL/6J小鼠等。近交系的很高均一性,可建立选用愈少的个人独资有体现了雷同统计分析学显著性性水平面的结论。有专著研究分析四个近交系(inbred strain)小鼠和两只远交系(outbred strain)小鼠在环己巴比妥麻醉师下的睡觉用时的的平对数正态分布和标准差,挖掘远交系的组内差距欧亚于近交系,型成统计分析学学差距的需求的组内动植物达到近交系的10倍。


该游戏设计也进第一步介绍信:表观遗传型的统一对调查范例量和调查结局的平衡性能起极为重要的的用途。


表1.dna型的均一性在来确定科学实验样本量量中的重点性(近交系与远交系小鼠在环己巴比妥全身麻醉實驗中的休息时段)



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(a) 入组动物数目

(b) 平均睡眠时间Mean sleeping time

(c) 睡眠时间标准差,该值越低则代表组内数据越稳定。

(d) 满足标准统计差异性分析所需样本量,在4分钟以上差异比较中的双样本 t 检验中显示5%的显著性差异(p-value)和90%的统计功效(power of test)。该值越低则代表组内数据越稳定,越容易获得统计学差异。

(e) 睡眠时间差异4分钟以上的差异比较的统计功率(样本量固定为20小鼠/组)。该值越高代表获得统计学结论的可靠性越高。



四倍体补偿技术对实验稳定性的影响

四倍体技术,是最近较热门的一种新兴技术。小鼠正常2细胞期胚胎(二倍体)经过电脉冲可融合形成四倍体胚胎,四倍体胚胎具有发育缺陷,只能发育形成胚体以外的组织结构,如胎盘、脐带等,而胚胎干细胞(Embryonic stem cell, ESc)能够分化形成体内所有的细胞类型。因此四倍体技术可获得完全来自于ESc遗传的F0代小鼠(而不是嵌合鼠),甚至在F0代获得纯合中靶小鼠。这看似加速了转基因动物获得纯合动物的进程。然而,大量的文献显示,四倍体技术会出现移植生仔率低(存活率:5.6%和3.1%)(表2)和动物发育不全的问题。


表2. 两倍体技木在C57BL/6N和BALB/c二者背静的ES神经元上有存活的长久软体动物的非常成效率

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(PMID: 34676093)

(a) C57BL/6N背景多个ES克隆的数据,(b) Balb/c背景多个ES克隆的数据


为了控制转基因方式所带来的遗传和表型变量,通常会将F0动物与近交系背景动物多次繁育以稀释和去除遗传变量并获得纯系,这个过程称为Backcross(回交),以此获得携带目标遗传修饰的且具有稳定的遗传背景的纯系转基因动物(如下图)。因此,如果将四倍体补偿技术获得的F0代小鼠直接用于动物实验,风险是不可控的!!!


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(视频修改图片自维基百度百科)图1. Backcross(回交)以取除转表观隔代遗传节肢动物备制带去的隔代遗传因变量 



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参考文献

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