1、PCR假阴性（扩增条带弱或无条带）

A 特征

● 样本目的意义条带始终无法 PCR扩增或条带弱；

● 阳性对照同样没有条带或条带极弱；

B  原因

● 目的片段条带过大导致扩增效率低；

● DNA模板质量较差或扩增体系不合适（扩增酶扩增效率不高或PCR程序不合适等）；

● PCR仪温控模块差异；

C  解决方式

● 设计备用引物，尽量缩短PCR产物大小；

● 使用试剂盒提取纯化DNA模板或优化鉴定体系（建议参照集萃ob电竞官网入口 推荐的程序进行鉴定）；

● 可尝试使用三步法PCR程序进行扩增，同时由于仪器、操作等环节依然存在变量，若上述处理无法改善，建议梯度测试最优退火温度。

2、PCR假阴性（泳道弥散状、伴随核酸挂孔或较严重的引物二聚体现象）

A  特征

● 胶孔大量发光，DNA无法脱离胶孔；

● 泳道出现弥散状抹带，通常伴随挂孔现象；

● 在胶图的最下方，常有比较明显的非目的条带；

B  原因

● DNA通过碱裂解、一步法试剂盒提取，未经纯化使用，蛋白裹在核酸上，导致核酸无法跑出胶孔；

● DNA模板附着较多杂质，影响引物的退火结合；

● 弥散的泳道通常为一些降解的核酸片段；

C  解决方式

● 重新纯化提取DNA或稀释DNA模板（降低杂质比例）；

● 更换备用引物或者使用高效率的扩增酶；

● 及时电泳，避免扩增产物长时间存放室温或4℃冰箱。

3、PCR假阳性（出现扩增污染）

A  特征

● 阴性对照、空白对照出现不符合预期的条带，通常会稍弱于阳性样品的主带，偶有与主带完全相同的亮度；

● 常发生于PCR产物小于500bp的反应中，产物越小，污染可能性越高；

B  原因

● 样品交叉污染，包括DNA模板、扩增体系配置或者电泳时污染；

● 气溶胶污染，少量样品鉴定时偶发，大批量样品鉴定、或者长时间使用同一对引物鉴定时发生频率明显增高；

C  解决方式

● 轻微污染时，提高退火温度、减少3-5循环、稀释DNA模板同时进行；

● 污染严重时，重新设计备用引物检测，条带不小于500bp，同时使用上述调整体系。

4、PCR特异性差（存在非特异性条带）

A  特征

除效果性条带外，产生同一特情人测序的最后，偶而非特情人最后与效果性带比较接近于，直接影响最后辨认；

B  原因

● 引物不特异；

● 酶的效率太强、退火温度偏低、退火延伸时间过长；

C  解决方式

● 非特异性扩增条带较弱时，提高退火温度、减少3-5循环、稀释DNA模板同时进行，可有效抑制非特异性扩增；

● 非特异性扩增条带较强时（杂带亮度与目的带几乎一样或者更亮），重新设计PCR引物。

5、PCR优势扩增

A  特征

被检个体户保持杂合壮态时，忽然会诞生较短片视频段等位染色体扩张产品高与或高出较长细节描写扩张产品，因此概率有颗条带可以不了扩张；

B  原因

● 当一个PCR反应中存在超过一种产物时，不同的产物会存在竞争性扩增，导致其中一种产物的产量远大于其他产物；

● 通常小条带比大条带更容易扩增，且两条带差距越大，优势扩增现象越明显；

● 个别情况下，比如产物序列存在特殊结构，也会出现大条带优势扩增现象；

C  解决方式

集萃ob电竞官网入口 司法鉴定工作方案为不要优缺点扩张要素，通畅三条带对比大于300bp，会对应设计的引物采用证实，不要优缺点扩张出来。

6、电泳条带弯曲

A  特征

电泳结果显示现身“笑脸表情状条带”；

B  原因

备制琼脂糖抑菌抑菌凝胶时，烧开后背分水分含量蒸发掉，造成的琼脂糖抑菌抑菌凝胶中的电泳液盐氨水浓度，过于电泳槽中的电泳液盐氨水浓度。这个时候胶孔中的PCR化合物，机构部位迁徙速度单位快，周圈挨到电泳液的化合物迁徙速度单位慢，展示出频发的可以弯曲的；

C  解决方式

烧开，然凝胶的作用的作用后，须得移除图片萃取水，补齐挥发的体型，须得重视缓缓移除图片，并同一时间均匀的的摇晃，规避产品局部降低温度的过快，造成 凝胶的作用的作用闭式冷却塔不均匀的的行成成坨。

7、实际电泳条带与目的带大小不符

A  特征

经历过与Marker或某个对应对比，其实胶图上的意图带与判定预案中标单位记的物品各个不相符；

B  原因

● 凝胶问题（质量较差、浓度较低）或者电泳时间不合适；

● Marker质量问题；

● 序列更新或标记的产物大小有偏差；

C  解决方式

● 调整凝胶浓度、电泳条件等条件（建议参照集萃ob电竞官网入口 推荐的电泳体系）；

● 更换合适品牌的Marker；

● 尝试使用备用引物。

在同个PCR作用模式中，有着2种或俩种上面的PCR物质时，与众不同的物质PCR增加错误率有着距离，成为PCR的优势可言PCR增加干涉现象（如图已知示1，物质②的PCR增加错误率强烈大于物质①)。

示意 1

表现形式：

当不同终乙酰乙酸的GC含水量更加接近、终乙酰乙酸中不现实存在特色结构设计且连通周期充裕时，小条带的增加利用率优于大条带的增加利用率。

产生原因：

①基于Taq酶在反复不断地的退行-去应力退火-延长的过程 中，酶的活力在一直降底（一般是35-40循坏后酶是解离），而20-40循坏中根据酶活的降底，大段落物品的延长生物富集成功率也大降底，而小段落的延长成功率受印象较小，故PCR循坏中，小段落物品的PCR扩增水平将高远于大段落的物品；②方面想法工作体系中，引物就摸版图片的灵敏性较低，若在PCR循坏的初始值步骤（前5-10循坏），都已经产生了了大量的小片断生成物生物富集，那么好之后的循坏中，基本数想法会以小片断的生成物作为一个摸版图片进行扩张；上面两大缘由累积，致使小情节货物的含水量博以上大情节货物的含水量（相当于指标值级的对比），故电泳时，小条带饱和度将长远于大条带的饱和度，虽然几乎始终无法查重到大条带的有着。

优化方案：

将检验各种不同DNA型的不起作用，依次适用PCR扩张，即在设计怎么写PCR设计怎么写时，挑选各种副产物的特异形验正设计怎么写（一般来说分析世界上最大条带为能够扩张条带，大条带无论什么情况下什么情况下扩张成功的英文，原因都存在风险存在比较大的，不于分析适用）。另一个整改工作方案：①换成产品更好的taq酶，让高再无限循环数时的酶活尽可能的做到最 佳动态；②换成PCR扩增引物，尽可能的规避低再无限循环的生成物聚集。

特殊情况：

在二者化合物的场面描写存在的的空间结构的上的相互影响、或存在的的分明的GC含铁區別时，竞争优势测序的化合物将变成GC光滑、且可含高级工程师空间结构的的你的微笑化合物，此生产率竟然也可以扩大上面的条带主产生的测序生产率相互影响。右图示2图甲中，化合物①的GC含铁光滑，但化合物②的GC含铁非常高，任何就算化合物②条带远值为化合物①,但测序生产率依然是化合物①更高的。

构造 2

什么是核酸气溶胶污染？

核酸气溶胶被新鲜空气当中废弃物源， 即 DNA/RNA 气溶胶被新鲜空气当中废弃物源，是研究设计室中更易有的的一种新鲜空气当中被新鲜空气当中废弃物源。新鲜空气当中与固态的液面撞击， 抽滤机抽滤，强烈摆动反应迟钝管， PCR 开盖，移液器不间断吸样， 被新鲜空气当中废弃物源物外泄等情況均会制造核酸气溶胶 。这一被新鲜空气当中废弃物源的的影响对 PCR 研究设计后果尤其要同质性 ：极氢化物发生器的核酸气溶胶被新鲜空气当中废弃物源, 能够出现 PCR 扩张假阳型。 

气溶胶污染的表现形式：

● PCR 实验性中， 以去亚铁离子水为微信小程序模板的 PCR 货物， 也是可以测序出目的性条带， 在在排除装修标准造成的环保问题 、打样定制间交叉式造成的环保问题的事情下， 就行判定的存在气溶胶造成的环保问题；

● 由于此类污染的 PCR 扩增模板实际为游离的气溶胶核酸片段， 通常情况下为核酸碎 片 ， 且含量极低， 对于大片段的 PCR 扩增影响较小， 故通常出现在 PCR 产物大小在80-500bp 的 PCR 反应中。

气溶胶污染的预防及清理措施：

● 良好的实验习惯： PCR 实验前， 使用 75%乙醇， 进行桌面 、移液器的擦拭； 实验过程 中 ， DNA 提取 、 引物溶解 、 PCR 体系配置时，尽量避免剧烈震荡， EP 管的开关尽量轻柔，如发生样品飞溅时，及时使用 75%乙醇擦拭 2 次。

● 实验室环境控制 ：保持每天至少 4 个小时的通风， 尤其是冬夏开空调时期， 气溶胶污染高发。

● 当已经发现气溶胶污染时， 除了上述操作外， 我们会每天增加 8 小时的紫外照射， 并 开启实验室的负压通风装置， 由于气溶胶污染的顽固性， 通常 3 -4 周， 才可以完全清 除 。 而对于进行中的 PCR 实验， 我们建议在超净台/通风橱进行 PCR 实验， 开封新的试剂 、耗材（EP 管 、 引物 、酶 、 去离子水等） ， 由于气溶胶核酸片段不完整 、含量较 低， 所以提高 PCR 程序中的退火温度， 同时降低 3 -5 个循环， 效果也比较明显； 条件 允许时， 可以尝试更换 PCR 扩增区域， 将扩增片段控制在 800bp 左右， 也可以有效避免此类问题。